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分光光度计法测亚硝酸盐
发布时间:2019-03-15 点击次数:606次

分光光度计法测亚硝酸盐

亚硝酸盐在亚硫酸盐氧化酶存在时被氧化成硫酸盐,同时释放出过氧化氢。在NADH过氧化酶的作用下过氧化氢被降解,NADH转化成NAD+,NADH向NAD+的转化能够以分光光度计法在340nm处检测,转化量与亚硫酸盐的浓度相关。

不同样品中对亚硝酸盐的检测

准备样品溶液  常规:除去含量大于100mg/kg或100mg/L的高浓度抗坏血酸(如水果汁)如果被测样品中的亚硫酸盐含量高于0.3g/L时,稀释样品,或取更小体积的样品用于检测。
 液态样品
1.白葡萄酒、白兰地、啤酒:白葡萄酒和白兰地可以直接分析,啤酒在分析之前必须要将二氧化碳除掉,同时可能有必要将啤酒脱色。脱色方法:在50mL的玻璃烧杯中往10mL过滤过的啤酒中加入不超过0.7g的白土(火山灰形成的一种黏土),用磁力搅拌器混合2min,然后过滤,将滤液收集到另外一个50mL的玻璃烧杯中。
取100~200ul的葡萄酒或500ul的白兰地或啤酒用于酶法检测分析。
2.红葡萄酒  将置于烧杯中的25mL红葡萄酒的PH用氢氧化钠溶液调到7.5~8.0,将溶液转移到50mL的容量瓶中,然后加水到刻度混匀,通常有必要使红葡萄酒脱色,其方法在水果汁处理方法中有介绍。
3.水果汁:将浑浊水果汁在2000g的条件下离心,加5mL果汁到烧杯中,并用氢氧化钠溶液将PH调节到5~6,加大约40个单位的抗坏血酸氧化酶溶液到果汁中,静置10min以除去抗坏血酸,或者用涂有抗坏血酸氧化酶的刮刀搅动果汁3min以除去抗坏血酸,然后再用氢氧化钠溶液将PH调节到7.5到8.0.如果是有颜色的果汁,首先加大约0.25g的交联聚乙烯吡咯烷酮,搅拌1Min,将混合物转移至10mL容量瓶中,加水至刻度,将溶液过滤,取200ul用于酶法分析。
3.固态食品   将样品充分粉碎均质,并在60℃下用水提取5min,提取过程中不时振荡,在分析之前将样品冷却至室温。根据亚硫酸盐含量的不同取不同体积的样品,如土豆饼检测时,取5.0g均质后的样品到50mL容量瓶中,加40mL水,塞上塞子,在60℃水浴下提取5min,提取的过程中间或振荡,可以静置至少15Min,冷却至室温,也可以放到20℃水浴中冷却,加水至刻度,如有必要将溶液离心,备用。
一些其他食品取样量建议如下:
1.干果:1.0g样品/50mL水
2.果酱:5.0g样品/50mL水
3.调味品:0.1g样品/50ml水
4.干土豆制品:2.0g样品/50ml水

按上述方法操作,一般在20~25℃取100ul样品到石英比色皿中,如果样品体积不到100ul,需加水调节以使水和样品的最终体积为2.00mL。检测过程中如果反应没有停止,保持每隔2min读一次吸光度,直到最后吸光度值变化恒定。如果吸光值持续下降,那就倒推样品在添加亚硫酸盐氧化酶悬浮液时的吸光值,从而计算A2用量。


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